### 培养条件

培养细胞的基础条件为1640培养基，加入10% FBS和1% PS，采用贴壁和悬浮培养，温度设定为37℃。这种培养条件适用于各种细胞类型，可以优化细胞的生长及繁殖。

### 传代方法

第一次传代建议采用1:2的比例。如果细胞的汇合度未超过80%，则应将培养液转移至离心管中，保留5ml完全培养基，并置于37℃、5% CO₂的培养箱中培养。若细胞密度超过80%，则可以直接进行传代。

### 细胞处理注意事项

在收到细胞后，应使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，随后在超净台中进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO₂的培养箱中静置3-4小时，以使细胞状态稳定。在这段时间内，利用显微镜观察细胞生长情况并拍照保存，建议拍摄40x、100x和200x倍数的照片，前三天的照片作为重要的售后依据，未提供照片则默认细胞状态良好。

### 细胞传代步骤

贴壁细胞传代步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃的培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况。当细胞大部分变圆并脱落时，迅速将其取出，并添加5ml以上的完全培养基以终止消化。

3. 轻轻吹打细胞，使之完全脱落，转移悬液至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。

4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最终放入37℃、5% CO₂的培养箱中继续培养。

悬浮细胞传代步骤如下：

1. 采用半换液法，将细胞培养瓶竖置于培养箱中静置约1小时，轻轻吸掉3ml左右的培养基，然后补充3ml的完全培养基。如果培养基变色慢，可以直接加入约500ul的FBS。

2. 进行分瓶时，先将细胞悬液收集至离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃去上清，随后补加1-2ml培养液后重悬，并按1:2的比例分瓶。

### 细胞冻存

当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次，随后添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，翻转培养瓶观察。待细胞明显回缩变圆后，添加5ml完全培养基终止消化。轻轻吹打细胞使其脱落，转移悬液至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。最终，弃去上清，沉淀细胞加入1ml无血清冻存液（如XPJ牌的冻存液），混匀后装入冻存管中。将冻存细胞直接置于-80℃冰箱中保存，若需转入液氮罐，需先在-80℃冰箱存放超过24小时。

### 细胞复苏

细胞复苏时需从液氮中取出冻存管，迅速将其置入37℃的水浴中解冻，直至无结晶。用75%的酒精擦拭冻存管外壁，然后将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管，1000 RPM离心5分钟。弃去上清，加入5ml培养基重悬后接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO₂细胞培养箱中继续培养，次日更换新鲜的完全培养基。

### 注意事项

由于某些细胞在运输过程中可能会脱落，这是正常现象。如脱离的细胞较多，建议将培养瓶内培养液收集至离心管中，1000 RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养。随后，可加入胰酶进行细胞重悬，再按1:2比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，置于合适的培养条件下继续培养。

综上所述，XPJ品牌提供的细胞培养服务，结合科学的操作流程与严格的质量控制，确保细胞培养的最佳效果。