粒曼专注于提供细胞体外基因敲除解决方案，特别针对细胞基因敲除的定制服务。截止目前，我们已经推出以下细分敲除服务，欢迎咨询粒曼团队，以获取相关技术路线及成功案例资料。

基因敲除定制服务概述

粒曼为客户提供真核细胞体外基因敲除的定制服务。为了进一步提升客户体验，我们的团队将定期更新常见问题解答（Q&A），以便更好地服务我们的用户。

常见问题解答（Q&A）

以下是关于基因敲除定制服务的前20个问题，供您详细了解：

基因敲除服务指南

了解粒曼高通量基因敲除定制服务（RNP法）相关内容，接下来的问题包括：

如何验证基因敲除是否成功？

验证基因敲除成功与否，可以通过对相关基因的表达情况进行分析，结合PCR、测序等技术手段来确认结果。

精准敲除与模糊敲除的区别

(1) 精准敲除：通过同源重组（HDR，Homology-Directed Repair）机制，在目标基因中引入精确的修饰，例如特定片段删除、点突变或插入，从而完全或部分失活基因功能。粒曼提供精准敲除定制服务，针对靶基因特定区域的核苷酸序列进行精确编辑。

(2) 模糊敲除：利用非同源末端连接（NHEJ，Non-Homologous End Joining）机制，在目标基因的特定区域随机引入插入或缺失（Indel）突变，导致基因功能破坏。

CRISPR/Cas9方法的最大片段敲除范围

理论上，CRISPR/Cas9方法可以敲除1kb至1Mb的片段，结合多靶点切割技术或其他技术（如CRISPRa/i、表观遗传修饰），能实现超大片段的敲除。

提升原代细胞编辑效率的方法

可以通过以下方式提升原代细胞的编辑效率：使用病毒载体（如慢病毒/AAV）整合至基因组，应用电场诱导细胞膜穿孔，直接核转染Cas9-RNP，或通过阳离子脂质纳米颗粒包裹Cas9-sgRNA复合物。

如何提高基因敲除效率？

可通过优化转染条件和选择合适的细胞类型来进一步提升基因敲除的效率。

表型变化分析

在基因敲除后，需通过一系列表型分析实验，如细胞增殖、功能检测等，来观察和确认相关的表型变化。

纯合敲除与杂合敲除的区分

我们可以根据遗传测试和基因型分析来鉴别纯合敲除与杂合敲除的样本。

CRISPR RNP法的适用细胞及场景

CRISPR RNP法适用于多种细胞类型，包括但不限于原代细胞和肿瘤细胞，广泛应用于生物医学研究及疾病模型构建。

结论

CRISPR/Cas9 RNP基因编辑法以其高效、稳定的遗传传递方式，正逐步替代传统的基因编辑方法。通过将多条针对靶基因的single-guide RNA（sgRNA）与Cas9蛋白结合，我们可以实现“瞬时”转染，显著提高基因敲除细胞系构建的效率。借助于粒曼的科研服务，您可以有效避免病毒基因组的随机整合和高脱靶风险，确保细胞基因组的稳定性，促进后续功能性实验的发展。