XPJ的人B细胞淋巴瘤OCILy19培养说明书如下：

一、细胞培养条件

细胞名称：人B细胞淋巴瘤OCILy19
生长特性：悬浮生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S
传代方法：建议第一次传代比例为1:2
传代情况：每2天更换培养液
备注：使用无菌离心管收集瓶子中的培养基，以便进行对比培养。若对比效果不佳，建议直接购买XPJ的完全培养基。

二、细胞收到后处理

收到细胞后，培养至良好状态后，灌满完全培养液并密封瓶口，这是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行严格的无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以确保细胞状态稳定。通过显微镜观察细胞生长情况，并拍照保存不同放大倍数的照片（推荐40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片，则默认细胞状态良好。建议在传代后用原瓶的完全培养基与自行配制的完全培养基进行对比培养，换液后将瓶盖松开。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代：

若细胞未超过80%汇合度，将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基并置于37℃、5% CO2孵箱培养；若细胞密度超过80%，可进行传代。具体步骤如下：

• 弃去上清液，用不含钙、镁的PBS润洗细胞1-2次。
• 向培养瓶中添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况。当细胞大部分变圆并脱落时，迅速将培养瓶拿回操作台轻敲几下，然后加入超过5ml的完全培养基以终止消化。
• 轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，以1000RPM的速度离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
• 按1:2的比例将细胞悬液进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

b、细胞冻存：

当细胞生长覆盖培养瓶80%时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞一次；接着，向培养瓶中添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞状态。当细胞开始回缩并变圆时，加入5ml完全培养基以终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；随后，弃去上清，加入1ml的XPJ无血清冻存液（货号：C7001），混匀后装入冻存管中。最后，将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中。如果后续需要将细胞转入液氮罐中，需在-80℃冰箱中存放24小时以上再转入液氮罐。

c、细胞复苏：

从液氮中取出冻存管（请佩戴防护面具），迅速将其置于37℃水浴中解冻，直到冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；弃去上清，沉淀再用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，并置于37℃、5% CO2的培养箱中培养；次日，更换新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

部分细胞可能不易附着，在运输过程中可能会发生细胞脱落，这属于正常现象。如果细胞脱落较多，可以将培养瓶中的培养液收集至离心管，进行1000RPM离心5分钟，收集上清作对比培养的过渡培养；沉淀中加入胰酶1-2ml，轻轻吹打后重悬，消化1-2分钟后再加入5ml完全培养基终止反应。重复离心、弃上清、重悬，最后按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，置于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

XPJ提供相应的售后服务，如果细胞出现问题，可重发的情况包括：

• 细胞在运输过程中的各种问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，会重发。
• 细胞污染问题需在收到产品48小时内提供真实的实验结果，核实后可重发。
• 常温发货的细胞在静置24小时后，干冰运输的细胞复苏24小时后，如果大部分细胞未存活，需提供真实清晰的细胞状态照片，符合条件者可重发。
• 若细胞在运输到达4小时后未开封出现污染，则符合条件可重发。
• 对于细胞活性问题，需在收到产品7天内提供实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后重发。
• 收到细胞当天及第2、3天内需拍照，3天内未告知的视为细胞合格。
• 如在4-7天内出现问题，需提供收到细胞前3天和细胞出现问题时的照片及详细操作步骤，接受技术人员判定后可重发。

• 客户造成的细胞污染，不予重发。
• 客户不当操作导致细胞状态不佳，不予重发。
• 非XPJ推荐的细胞培养体系导致的细胞状态不佳，不予重发。
• 未提供细胞培养前3天的照片，不予重发。
• 细胞培养期间经过其他处理的，不予重发。
• 收到后2天内未告知的，不予重发。
• 其他情况根据具体情况而定。